ТУРБИДИМЕТРИЯ И НЕФЕЛОМЕТРИЯ

ФОТОЭЛЕКТРИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

В фотоэлектрических методах определяется мощность светового потока, прошедшего через исследуемый раствор с помощью фотодетекторов – приемников светового излучения. В современной аппаратуре это, в основном, фотоэлементы и фотодиоды. В отличие от глаза,

который субъективно воспринимает характеристики светового излучения с учетом спектральной кривой видности, фотоэлектрические детекторы реагируют на мощность светового потока (см. рисунок 44). Простейшая схема для измерения поглощения окрашенных растворов.

Оптические приборы, измеряющие полихроматический (в спектральной полосе 7-12 нм) световой поток только видимого диапазона называются фотоэлектроколориметрами. Приборы, измеряющие световой полихроматический световой поток в ультрафиолетовом, видимом и инфракрасном диапазонах, называются фотометрами. Методы исследования веществ с использованием фотометров называются фотометрическими.

Турбидиметрия и нефелометрия в клинической химии используется в основном для определения индивидуальных белков. Особенностью таких определений является построение калибровочного графика с использованием не менее пяти концентраций, так как калибровочный график имеет нелинейный характер.

Кривая доза-эффект. (Калибровочный график, отражающий реакцию взаимодействия антигена и атитела).

Реакция антиген-антитело, проявляется в растворе в виде образования агрегатов. Схематически реакцию взаимодействия антигенов (Ag) с антителами (At) можно изобразить следующим образом: если при определении антигена ввести в тест-систему постоянное количество антител, то при невысокой концентрации белка (антигена) все антигены связаны с антителами, если образующиеся иммунные комплексы осадить центрифугированием, то в супернатанте можно определить несвязанные антитела. Такое явление называется избытком антител или антитело-эксцесс. При увеличении концентрации Ag повышается оптическая плотность.

Когда концентрация антигенов и антител пропорциональна, происходит связывание всех антител и антигенов, такой комплекс выпадает в осадок в виде преципитата и в супернатанте не определяются антитела и антигены. Такое состояние определяют как эквивалентное.

При дальнейшем увеличении концентрации антигенов количество антител бывает недостаточным для полного связывания белка. При этом частицы иммунных комплексов становятся мелкими, преципитат практически не формируется. В супернатанте при этом определяются свободные антигены.