Синхронизация клеток

При необходимости получить популяцию клеток, находящихся в од-

ной и той же фазе клеточного роста, используются два различных прин-

ципа.

1. Можно блокировать клетки таким образом, чтобы они накаплива-

лись на специфической стадии цикла. Блокировка может быть химиче-

ской или физиологической, но оба этих метода имеют тот недостаток,

что клетки подвергаются неблагоприятному воздействию и в результате

становятся по некоторым параметрам аномальными.

2. Можно отобрать клетки, находящиеся на определенной стадии

клеточного цикла. Отбор может происходить на основании тех или иных

физических свойств, например слабого прикрепления митотических кле-

ток к субстрату или различного содержания ДНК в клетках, находящихся

на разных стадиях клеточного цикла. С другой стороны, отбор можно

производить на основе химических свойств, вызывая избирательную ги-

бель остающихся клеток.

Выбор метода зависит от целей эксперимента. В ряде случаев бывает

целесообразно проводить начальную стадию эксперимента на не син-

хронизированной экспоненциально растущей культуре и затем отбирать

клетки на определенной фазе клеточного цикла.

Клетки, растущие в монослое, при делении принимают форму шара.

Поэтому во время митоза они оказываются менее прочно прикреплен-

ными к субстрату и могут быть легко отделены от него. При работе этим

методом используются экспоненциально растущие клетки, и важно на63

протяжении всей процедуры поддерживать постоянное значение рН и

температуры.

В основе метода избирательной гибели клеток лежит гибель клеток в

определенной фазе клеточного цикла, что приводит к избирательному

отбору клеток, находящихся вне фазы-мишени. При экспоненциальном

росте клеток и прохождении клеток по клеточному циклу увеличение

периода экспозиции приводит к снижению количества выживающих

клеток и ширины диапазона клеточного цикла, в котором оказываются

выживающие клетки.