q Построить графики зависимостей Fo, Fm и Fv / Fm от времени инкубации при разных концентрациях наночастиц. ( в процентах от контроля).
q Для опытных образцов с изменениями в значении Fv/Fm в 20-30 % построить графики световых зависимостей параметров флуоресценции Ft, Fm’, Yield, qN, NPQ, rETR и сравнить с параметрами контрольного образца. ( см. для примера рис.7. с нанотрубками)
q На основании полученных световых кривых rETR рассчитать следующие фотосинтетические параметры: коэффициент максимальной утилизации световой энергии (угол наклона световых кривой, α), максимальную относительную скорость электронов по электрон транспортной цепи (rETRmax) и насыщающую интенсивность света (Ен). Данные представить в таблице и сравнить с контрольным образцом. ( см. для примера таблицу с нанотрубками)
q Если для каждой пробы делалось несколько измерений, то определить перечисленные соотношения для каждого из зарегистрированных кривых, а в итоговую таблицу внести средние значения и стандартное отклонение или ошибку среднего.
q Для опытных образцов с изменениями в значении Fv/Fm в 20-30 % построить и рассчитать параметры индукционных кривых флуоресценции ( расчет по JIP-тесту). Данные представить в таблице и сравнить с контрольным образцом.
q Представить в удобной для восприятия форме результаты проведенных экспериментов и провести обсуждение их и сделать четкие выводы по полученным результатам; Отметить параметры флуоресценции, которые наиболее сильно изменяются при повреждении культуры в присутствии наночастиц.
Ниже для примера приведены результаты, полученные в опытах по исследованию действию нанотрубок на параметры флуоресценции водорослей (статьяМаторин и др., Российские нанотехнологии. 2010. Т. 5. С. 321-328.
Рис. 7. Изменения параметров флуоресценции в зависимости от интенсивности действующего света в суспензии клеток C. reinhardtii под воздействием одностенных (SW) и многостенных углеродных нанотрубок (MW).Время инкубации- 1 сутки. A -квантовый выход фотохимического превращения поглощенной световой энергии в фотосистеме 2 как отношение Y= (Fm'-Ft)/Fm', B-относительная скорость нециклического электронного транспорта, C -нефотохимическое тушение NPQ=(Fm/F'm)-1. (1) -контроль , (2)- после добавления одностенных (SW) и (3,4) - многостенных углеродных нанотрубок (MW) в концентрациях 0,5 мг/мл и 1 мг/мл , соответственно .
Таблица. Изменения параметров световых зависимостей флуоресценции клеток C. reinhardtii в контроле и после добавления нанотрубок (суточная инкубации)
Параметры флуоресценции
Контроль
SW трубки
(2 мкг/мл)
MW трубки
(1 мкг/мл)
MW трубки
(2 мкг/мл )
Fv/Fm
0.73±0.001
0.70±0.01
0.68±0.01
0.57±0.03
Y(при 400 кЕ/(м2с)
0.17±0.02
0.15±0.07
0.12±0.04
0.11±0.03
ЕY1/2 мкЕ/(м2с)
166±8.5
161±9.1
121±7.6
128±6.2
rETR (max.) (отн.ед)
23.8±1.7
22.7±1.3
20.6±1.5
17.9±0.9
α
0.23±0.02
0,22±0.01
0.168±0.01
0.149±0.03
Eн. (мкЕ/(м2с)
120.2±14.2
124.1±13.5
137.9±10.5
136.3±14.5
где, Fv/Fm - параметры проб в темноте; Y= (Fm'-Ft)/Fm' - фотохимическая активность ФС 2; ЕY1/2 -интенсивность света полуспада величины Y. Параметры, описывающие зависимость электронного транспорта (rETR) от освещенности (световые кривые): коэффициент максимальной утилизации световой энергии, угол наклона световой кривой(α), максимальная относительная скорость нециклического транспорта электронов (rETR max) и насыщающая интенсивность света (Ен).