русс | укр

Языки программирования

ПаскальСиАссемблерJavaMatlabPhpHtmlJavaScriptCSSC#DelphiТурбо Пролог

Компьютерные сетиСистемное программное обеспечениеИнформационные технологииПрограммирование

Все о программировании


Linux Unix Алгоритмические языки Аналоговые и гибридные вычислительные устройства Архитектура микроконтроллеров Введение в разработку распределенных информационных систем Введение в численные методы Дискретная математика Информационное обслуживание пользователей Информация и моделирование в управлении производством Компьютерная графика Математическое и компьютерное моделирование Моделирование Нейрокомпьютеры Проектирование программ диагностики компьютерных систем и сетей Проектирование системных программ Системы счисления Теория статистики Теория оптимизации Уроки AutoCAD 3D Уроки базы данных Access Уроки Orcad Цифровые автоматы Шпаргалки по компьютеру Шпаргалки по программированию Экспертные системы Элементы теории информации

Промышленные ППР сенсоры

<== предыдущая статья |

В табл. 23.1, указаны названия многих интеллектуальных ППР сенсоров, которые промышленно выпускались в начале ХХІ в. Все они рассчитаны на реализацию нескольких методик анализа, нуждаются в небольших объемах пробы, большинство из них частично автоматизированы. Некоторые имеют несколько каналов для одновременного сопоставительного анализа нескольких проб.

Таблица 23.1. Перечень оптических ППР сенсоров, разработанных к началу ХХІ в

Фирма

Название ППР биосенсора

Источник информации

1

Biacore AB

BIACORE 1000, 2000, 3000

Biacore.com

2

Reichert Analytical Instruments, Inc.

SR7000

www.reichertai.com

3

Affinity Sensors

Iаsys, Iasys Plus, Iasys Auto+

Affinity-sensors.com

4

IBIS Technologies

IBIS I, IBIS II

Ibis-spr.nl

5

Nippon Laser Electronics

SPR670, SPR Cellia

Nle-lab.cojp/English/ZO-HOME.htm

6

Texas Instruments

Spreeta

ti.com/sc/docs/products/msp/control/spreeta

7

Analytical -Systems

BIO-SUPLAR 2

Micro-systems.de

8

AVIV Instruments

PWR Model 400

Avivinst.com

9

Farfield Sensors Ltd

AnaLight Bio250

farfield-sensors.co.uk

10

Luna Innovations

Fіber optic prototype

lunainnovations.com

11

ThreeFold Sensors

Label-free prototype

ic.net/~tfs

12

Graffinity

Plasmon Imager

Graffinity.com

13

Leica

Prototype

Leica-ead.com

14

Prolinx

OCTAVE

Prolinxinc.com

15

HTS Biosystems

SPR array

Htsbiosystems.com

16

Quantech Ltd

FasTraQ SPR array

quantechltd.com

17

SRU biosystems

BIND

Srubiosystems.com

Одним из наиболее известных ныне в мире промышленных ППР сенсоров является "BIACORE 3000" шведской фирмы Biacore AB, показанный на рис. 23.7. Он состоит из мини-компьютера и сенсорного блока размерами 760x610x350 мм и массой до 50 кг. Рассчитанный на стационарное использование в лабораториях, он является наиболее высокопроизводительной и чувствительной исследовательской системой для изучения взаимодействия биохимических веществ. Чувствительность анализов достигает 1 пМ = 10–12 моля. Допустимый диапазон изменения показателя преломления исследуемой жидкости – от 1,33 до 1,40.


Рис. 23.7. Интеллектуальный ППР сенсор "Biacore 3000": слева – сенсорный блок, справа – общий вид

 

В оптимальных условиях проведения экспериментов BIACORE 3000 позволяет зафиксировать сдвиг резонансного угла от 10 RU до 70000 RU. Специально введенная единица 1 RU (resonance unit – единица резонанса) эквивалентна сдвигу, вызываемому связыванием 1 пикограмма (10–15 кг) протеина на 1 мм2 чувствительной поверхности. Способность регистрировать связывание биомолекул с такой высокой чувствительностью гарантирует надежность получаемых результатов и высокое качество их интерпретации. В системе параллельно работают и одновременно могут быть задействованы 4 проточных канала измерений. Результаты, полученные от канала сравнения, могут автоматически вычитаться из результатов, получаемых в других каналах, что позволяет повысить разрешающую способность и информативность каждого анализа.

Технические усовершенствования управляемой проточной системы обеспечили возможность автоматической загрузки исследуемых образцов, точную автоматическую инъекцию проб, регулирование скорости потока от 1 до 100 мкл/мин., минимальные затраты ценных реактивов. Для проведения эксперимента и регистрации сигналов связывания во всех 4 каналах хватает лишь 1 мкл раствора. Малый объем проточного канала 0,02 мкл свел потери к минимуму. Специальное программное обеспечение позволяет автоматически проводить заданные процессы иммобилизации белков на поверхности металлической пленки, исследовать как отдельные образцы, так и осуществлять серии исследований с автоматической сменой растворов или/и образцов, выполнять детальную обработку результатов, вычислять все нужные пользователю показатели кинетики биохимических реакций. Имеется, например, и программа моделирования взаимодействий, которая позволяет еще до загрузки реальных образцов оптимизировать условия и последовательность проведения экспериментов с ними.

С помощью сенсора Biacore 3000 можно изучать как малые молекулы, начиная от молекулярной массы 180 а.е.м., так и большие клетки, бактерии, антитела, и находить ответы на такие, например, вопросы, как:

  • насколько специфическим является связь между молекулами (клетками) двух данных видов?
  • с какой скоростью происходит их связывание?
  • насколько сильной является их связь?
  • при каких условиях можно её разорвать?
  • как влияют температура, кислотность, концентрация, вид растворителя или третье вещество (фермент, катализатор, антитело) на ход реакций их связывания?

Поэтому эта система и подобные ей широко используются для исследований функций отдельных белков и других биохимических веществ, молекулярного распознавания, для исследований и анализов в областях иммунологии, онкологии, вирусологии, инфекционных заболеваний, биотехнологии и др. Многочисленные применения такого типа ППР сенсоров описаны в сотнях работ. Сошлемся лишь на одну из них, где показана эффективность метода ППР для регистрации и изучения ферментативных реакций при участии NADH и NADPH, которые сыграют важную роль в биохимии.

Типичной технологией применения является следующая. На чувствительную поверхность ППР сенсора устанавливают специальную проточную ячейку (flow cell), которая через патрубки присоединяется к системе регулирования потока исследуемой жидкости с использованием перистальтического насоса и инъекционного клапана. Поскольку проточная ячейка и патрубки очень тонкие (для экономии дорогостоящих препаратов), все жидкости должны быть профильтрованы сквозь 0,2 мкм фильтр и тщательно дегазированы. Вся проточная система должна регулярно промываться специальными растворами.

При биохимических исследованиях обычно проводят подготовительный цикл. В этом цикле через проточную ячейку прокачивается сначала раствор протеина, который оседает мономолекулярным слоем на поверхность золотой пленки. Потом прокачивают раствор тех биохимических молекул или антител, взаимодействие которых с молекулами или частицами аналита нужно изучить. Они присоединяются к протеину и образуют биорецепторный слой (лиганд). Эта процедура может длиться 1...2 ч. В цикле измерений проточная ячейка и чувствительная поверхность сначала промываются несколько минут буферным раствором (рис. 23.8, фаза І). Потом через ячейку прокачивается заданный объем жидкости с исследуемым аналитом, и начинается измерение (фаза ІІ). Частицы аналита присоединяются к лиганду не сразу. Поэтому кривую ППР приходится измерять многократно, каждый раз рассчитывая по результатам измерений точное положение минимума ППР, и строить график его зависимости от времени. Этот график принято называть "сенсограммой". Всем этим автоматически руководит микропроцессор.


Рис. 23.8. Временная зависимость сдвига минимума ППР

 

Как видим из рис. 23.8, максимальная концентрация иммобилизованного (т.е. присоединенного к лиганду) аналита достигается лишь через несколько минут. Кинетика нарастания сдвига минимума ППР отображает кинетику химических реакций присоединения аналита к лиганду. Стационарное состояние, которое в конце концов устанавливается, является результатом динамического равновесия между химическими процессами присоединения и диссоциации (отсоединения) аналита и зависит как от констант соответствующих реакций, так и от концентрации аналита, температуры раствора, условий перемешивания и т.п. Это все можно исследовать.

В ходе следующей фазы (ІІІ) инжекция аналита прекращается, но продолжается прокачка чистой жидкости. Процессы присоединения практически прекращаются, идут лишь процессы диссоциации. Ход кривой на этой стадии позволяет вычислить константы этого процесса. А зная их, по результатам измерений в фазе ІІ можно вычислить и константы реакции присоединения. В фазе ІV через ячейку прокачивается раствор элюента, т.е. жидкости, которая, резко ослабляя химическую связь аналита с лигандом, постепенно "вымывает" аналит, практически не влияя на лиганд. И начинается регенерация биочувствительной поверхности, в ходе которой положение минимума ППР должно возвратиться к первоначальному. После этого можно начинать новый цикл измерений химического взаимодействия лиганда с другим или с тем же аналитом, но при других условиях. Практически удается провести свыше 50 разных исследований с одним и тем же лигандом.

Фирма Biacore AB выпускает и узко специализированные ППР сенсоры, как, например, BIACORE Quant, предназначенный специально для определения содержания витаминов.

Значительно более компактный интеллектуальный ППР сенсор SR7000 выпускает фирма Reichert Analytical Instruments, Inc. В нем используется расходящийся световой пучок и линейка фотодетекторов, которые обеспечивают наблюдение ППР в пределах углов отражения от 58,5 до 85 .


Рис. 23.9. ППР сенсор SR7000 фирмы Reichert Analytical Instruments, Inc

Для обеспечения равномерного распределения интенсивности исходящего светового пучка по углам применена т.н. "интегрирующая сфера". Оптическая призма выполнена из сапфира с показателем преломления 1,76. Чувствительный элемент на стеклянной подложке с показателем преломления 1,51 оптически соединен с призмой через тонкий слой иммерсионной жидкости.

Ученые и разработчики из лаборатории микроинструментов и систем университета в Майне (The University of Maine, показали, что размеры ППР сенсора совсем не обязательно должны быть большими, как в BIACORE 3000. На рис. 23.10 слева показана в поперечном разрезе структура интегрального оптоэлектронного модуля MISL, изготовленного с применением микросистемных технологий.


Рис. 23.10. Чувствительный блок ППР сенсора, изготовленного с применением микросистемных технологий: слева – структура интегрального оптоэлектронного модуля; справа – блок в собранном виде. 1 – основа из кремния; 2 – поворотное зеркальце с опорой, приводом и схемой управления; 3 – линейка фотодетекторов со схемой усиления; 4 – прозрачная жидкость и стекло над ней; 5 – пленка золота; 6 –лиганд; 7 – частицы аналита; 8 – оптическое волокно; 9 – микролинза с микропризмой

 

На основе 1 из кремния сформировано плоское миниатюрное зеркало 2, которое под действием электростатических сил может в пределах 10-20 вращаться вокруг оси, закрепленной на его приводе. В рабочем слое кремния сформированы также линейка фотодетекторов 3 с микросхемами усиления и селекции сигналов и микросхема управления приводом зеркала. Над кремнием сформирован слой стекла, в котором над зеркалом 2 и фотодетекторами вытравлена полость, заполненная прозрачной жидкостью 4. На поверхность стекла нанесена тонкая пленка из золота 5, необходимая для наблюдения ППР. Поверх пленки 5 формируется рецепторный слой 6, чувствительный к частицам аналита 7. К интегральному оптоэлектронному модулю подведено оптическое волокно 8, возле торца которого установлены коллимационная микролинза и микропризма 9. Через оптическое волокно 8 на модуль поступает монохроматический поляризованный свет. Микролинза формирует из него параллельный световой пучок, который отклоняется микропризмой на нужный угол и падает на зеркало 2. От зеркала свет попадает на чувствительную поверхность сенсора, а после отражения от нее – на линейку фотодетекторов 3.

Справа на рис. 23.10 показан чувствительный блок ППР сенсора в собранном виде. Его размеры приблизительно 20x10x2 мм. Над чувствительной поверхностью интегрального модуля устанавливают проточную ячейку, через которую можно прокачивать растворы.

Для снятия кривой ППР микропроцессор включает источник поляризованного света. Свет по оптическому волокну 8 передается в интегральный модуль. С помощью микросхемы управления зеркалом 2 последнее устанавливается под заданным начальным углом. Микропроцессор считывает сигнал с фотодетектора, на который падает отраженный от чувствительной поверхности свет. Потом увеличивает на один шаг (например, на 0,05 ) угол наклона микрозеркала 2 и считывает из следующего фотодетектора интенсивность отраженного сигнала. После того как шаг за шагом будет снята вся кривая ППР, микропроцессор выключает источник света и вычисляет точное положение минимума ППР в данный момент времени. Через заданные интервалы времени измерения повторяются. Таким способом микропроцессор строит и выводит на экран сенсограмму процессов присоединения и диссоциации аналита, может вычислять параметры химической кинетики и концентрацию аналита в исследуемом растворе.

Большинство промышленных ППР сенсоров работает с угловой зависимостью интенсивности отраженных сигналов. Вариант наблюдения спектральной зависимости интенсивности отраженных сигналов длительное время не использовался, поскольку спектральные узлы с оптическими призмами или дифракционными решетками имели довольно значительные габариты. Но после того, как появились довольно компактные спектральные узлы типа Фурье-спектрометров и др., о которых речь уже шла в лекции 18, ситуация изменилась. И, например, американская фирма GWC Technologies выпустила в продажу ППР сенсор SPRimager II (рис. 23.11), в котором используется инфракрасный Фурье-спектрометр. Резонансные кривые ППР наблюдаются в виде зависимости интенсивности отраженного света от волнового числа (см. рис. 23.3). Поскольку волновое число можно измерять с более высокой точностью, чем угол падения, то потенциально такой способ измерения является более чувствительным. Наилучшая разрешающая способность достигается в БИК свете с непрерывным спектром.

Сенсор спроектирован так, что в одной проточной ячейке может исследоваться одновременно целый массив разных проб. Образцы соответствующих "чипов" показаны на рис. 23.11 справа вверху. В них на стеклянной основе сформированы островки диаметром 0,75-1 мм из тонкой пленки золота, на которую осажден мономолекулярный слой протеина. С помощью микропипетки на каждый островок можно нанести микрокаплю (0,3-0,5 мкл) соответствующего раствора и иммобилизовать из него на слой протеина свой лиганд. Это позволяет исследовать взаимодействие одного и того же аналита с разными лигандами в идентичных условиях. Сенсор позволяет также в любой момент времени получить изображение одновременно всех исследуемых островков в отраженном под заданным углом поляризованном инфракрасном свете, т.е. в условиях наблюдения ППР (рис. 23.11 справа внизу).


Рис. 23.11. Слева – измерительный блок ППР сенсора SPRimager II; справа вверху – стандартные основы групповых рецепторных "чипов"; справа внизу – пример ППР изображения группового чипа

 

На таком "ППР изображении" с одного взгляда видно, с какими лигандами связывается исследуемый аналит, а с какими не связывается совсем [www.gwctechnologies.com]. Можно исследовать также неравномерность связывания по поверхности сенсора и с течением времени. Полученные изображения могут сохраняться в компьютере для демонстраций и для дальнейшей обработки. Угол наблюдения можно изменять в пределах от 40 до 70 .

С помощью ППР сенсора SPRimager II в появилась возможность, например, впервые наблюдать поверхностный плазмонный резонанс на тонких пленках оксидов металлов. Теоретически явление ППР можно наблюдать на поверхности любого проводника. Однако экспериментально его обнаруживали до сих пор на поверхности лишь благородных металлов. Использование в ППР исследованиях пленок оксидов металлов может значительно расширить область и возможности применения этого метода.

Широкое применение нашел ППР спектрометр, созданный в Институте физики полупроводников им. В.Е. Лашкарёва НАН Украины. На рис. 23.12 показана одна из последних моделей этого спектрометра "Плазмон - 5".


Рис. 23.12. ППР спектрометр "Плазмон-5"

 

Прибор работает со сменными биочипами, на которые нанесена золотая пленка толщиной 45 нм. Источником монохроматического света (670 нм) служит GаАs лазер. Положение резонанса определяется путем точного механического поворота призмы в пределах 17 . Работой прибора управляет персональный компьютер, который также обрабатывает результаты измерений и выводит их на свой дисплей или на печать. Габариты прибора 220x125x95 мм, масса 2,8 кг.

Просмотров: 814

<== предыдущая статья |

Это будем вам полезно:

Интеллектуальные портативные сенсоры для УЗ исследований

Потенциометрические датчики положения и перемещения объектов

Возможности высокоскоростной камеры Fastvideo-500M

Монолитные кремниевые гироскопы

Химические датчики прямого действия

Термоиндикаторы

Инкрементные энкодеры

Бесконтактные измерители скорости

Перепадно-силовые расходомеры

Расходомеры с поворотной лопастью

Неинвазивный сенсор кровенаполнения

Методы и средства измерения давлений, разности давлений, вакуума

Системы машинного зрения

Вернуться в оглавление:Методы и средства измерений неэлектрических величин




Карта сайта Карта сайта укр


Уроки php mysql Программирование

Онлайн система счисления Калькулятор онлайн обычный Инженерный калькулятор онлайн Замена русских букв на английские для вебмастеров Замена русских букв на английские

Аппаратное и программное обеспечение Графика и компьютерная сфера Интегрированная геоинформационная система Интернет Компьютер Комплектующие компьютера Лекции Методы и средства измерений неэлектрических величин Обслуживание компьютерных и периферийных устройств Операционные системы Параллельное программирование Проектирование электронных средств Периферийные устройства Полезные ресурсы для программистов Программы для программистов Статьи для программистов Cтруктура и организация данных


 


Полезен материал? Поделись:

Не нашли то, что искали? Google вам в помощь!

 
 

© life-prog.ru При использовании материалов прямая ссылка на сайт обязательна.